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    豚鼠T淋巴細胞的測定
    更新時間:2012-02-14   點擊次數(shù):2363次

    玫瑰花環(huán)試驗,又稱為花結試驗。是測定淋巴細胞數(shù)量和功能的一種方法。
    人類T和B淋巴細胞表面具有不同的受體。由于人類T淋巴細胞表面具有與綿羊紅細胞結合的受體,能與綿羊紅細胞非特異性結合,形成E花環(huán),因此,T細胞也成為紅細胞花瓣形成細胞。根據(jù)E—玫瑰花環(huán)形成率,可以間接判斷機體細胞免疫力。目前,已廣泛應用于臨床,作為測定人群免疫狀態(tài)的一個指標。
    材料:
    1.肝素(100單位/毫升)
    2.0.5%兔紅細胞懸液(用Hanks液配制)
    3.吸收過的胎牛血清:
    取經(jīng)56℃30分鐘加熱滅活后的胎牛血清加半量壓積兔紅細胞混合后,37℃水浴20分鐘,2000轉/分離心10分鐘,取上清液即成。
    4.Hanks液
    5.豚鼠抗凝血
    6.淋巴細胞分層液
    7.滅菌注射器,針頭,試管,吸管等。
    方法:
    1.淋巴細胞提取
    (1)取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀釋。加于3毫升淋巴細胞分層液液面之上。
    (2)2000轉/分離心30分鐘,吸淋巴細胞層到另一試管中加5倍體積的Hanks液洗1—2次,(1500轉/分離心10分鐘)棄上清即成。
    1. 加吸收過的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔紅細胞懸液0.2毫升,于淋巴細胞中。混合后,37℃水浴5分鐘。
    2. 500轉/分離心5分鐘,放4℃冰箱中2小時后,棄大部分上清。
    3. 染色及觀察輕輕懸浮沉積的細胞。向懸液中滴一滴美蘭液,混合,10分鐘后取一滴放載玻片上,加蓋玻片鏡檢。高倍鏡或油鏡下計數(shù)200個淋巴細胞,凡結合3個或3個以上的兔紅細胞者為陽性,計算花環(huán)形成細胞的百分率。
     

     

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